Stap 1: Kweken van cellen
-Voordat we om het even wat, handschoenen en STERILISEREN beginnen.
-Steriliseren is uitermate belangrijk in het weefsel engineeringproces. Besmetting van chemicaliën of bacteriën kan vernietigen weken van het werk en afval van al het geld in het project gestoken. Ethanol is uw nieuwe beste vriend; mensen zouden kunnen denken Word je heb een alcoholist als ze ruiken uw nieuwe vriend op je de hele tijd, maar het is het beste ding ooit. Ook wees niet overmatig bezorgd wanneer u het vrijwel allemaal morsen van het lab; het is super snel verdampt.
-Zodra steriele open de incubator die je heb het opslaan van uw botcellen in.
-Wij willen nu samenvloeiing controleren. Confluence is weefsel talk voor cel bevolkingsdichtheid.
-U wilt > 85% (ongeveer) samenvloeiing voor passaging cellen. Wat betekent dat 85% van het bekijken gebied dat u door uw Microscoop zien cellen heeft. Dit is belangrijk om te blijven op de top van omdat confluente cellen niet reproduceren blijft. Het is ook goed om te groeien net zoveel cellen als mogelijk omdat ze een waardevolle hulpbron die u misschien nodig hebt.
-Als niet confluente, moet u uw cellen meer tijd te geven om te groeien. Dus het steriliseren van de kolf, breng het aan de Bank biohood/schoon, en aspirate de media eruit terwijl bewust van niet schraap de onderkant van de kolf dat de woonplaats van de cellen. Gooi uw Pipet. Met een nieuwe Pipet, gewoon de onderkant van de kolf te vullen met nieuwe media.
-Als confluente, zal u moeten passage van je cellen.
- Steriliseren kolf en breng het aan de biohood.
- Gecombineerd media zonder Schraap de onderkant van de kolf. Pipetteer negeren.
- Wassen cellen in PBS door pipetteren in de maatkolf genoeg PBS ter dekking van de bodem. Zachtjes kantelen de kolf heen en weer.
- PBS gecombineerd en Pipetteer negeren.
- Genoeg trypsine Pipetteer in de kolf ter dekking van de bodem. Kantel het heen en weer.
- Steriliseren kolf en laat het gedurende 2 minuten inwerken.
- De cellen en trypsine gecombineerd, en voegt u deze in een centrifugebuis.
- Centrifugeer gedurende 5 min op 1300 rpm (Bekijk centrifugeren techniek en vergeet niet de ballast).
- Gecombineerd trypsine terwijl het bewust zijn van het niet nemen van de cel-pellet. Pipetteer negeren.
- Een bekend volume van media invoegen in de buis.
- Media en pellet op te schorten de cellen gecombineerd.
- Het uitvoeren van een telling van de cel om te begrijpen uw celdichtheid per volume-media.
- Uw geschorste cellen verdelen over nieuwe kolven.
- Betrekking hebben op de bodem van de kolven met media. Mark de kolf, met de datum en uw naam. Steriliseren en uit te broeden.
Bijgevoegd is de cel cultuur handboek we in de klas gebruikten. Het is zeer grondig en een geweldige bron.
