Stap 3: Cellecting Raw-gegevens
Als u gekleurd voor meerdere kleuren, dat is wat ik deed, moeten we scheiden om te analyseren één filter tegelijk. Ik stianed met DAPI, een nucleaire vlek te identificeren van afzonderlijke cellen (blauw), en voor B1-integrins (rood). Ik wil alleen meten B1-integrine expressie dus gescheiden van de kleuren die ik deze stappen volgde:
"Afbeelding" -> "Kleur"--> "Kanalen splitsen"
Dit gaf me drie kanalen (nu alle tonen in grijze beelden), een rode, blauwe en groene kanaal. Het rode kanaal had mijn integrine vlek blauw had de DAPI vlek en groene was emtpy omdat ik heb geen vlekken voor alles groen tijd verdunt. Ik had alleen de rode, dus ik de andere twee vensters sloot.
Nu ik zoomde in op mijn cel verplaatsen van mijn cursor boven de cel en klikt u op de pijl-omhoog op mijn toetsenbord. Toen ik geselecteerd van de "freehand selecties" tool (de nieren gevormde knop) en mijn cel beschreven zoals. Vervolgens metingen, net klik "m" op uw toetsenbord. Dit zal een venster openen met onze gewenste metingen die we eerder op hen kozen.
Nu moeten we nemen metingen voor onze achtergrond. Dus de "rechthoekige" gereedschap selecteren en selecteert u een gedeelte van de achtergrond, ervoor zorgend om alleen gaan over de lege ruimte en niet op andere cellen. Klik vervolgens nogmaals op "m". Doen dit drie keer totaal hebben we drie achtergrondmetingen gemiddelde uit.
