Stap 15: Geavanceerde DIYBio genetische analyse: DNA-extractie
Meest professionele genetici, me opgenomen, heb de luxe van het hebben van een onderzoek-rang en/of de GLP faciliteit lab om werk te doen. Hoewel ik niet werken elke DIYBio projecten op, het zich veroorloven me de mogelijkheid om mezelf vertrouwd te maken met moleculaire biologietechnieken voordat ik probeert te herscheppen hen thuis.
Veruit, een de moeilijkste technieken te doen thuis is ook een van de meest elementaire voor ons begrip van genetica, DNA-extractie en Polymerase Chain Reaction (PCR).
Verschillende Instructables gebruikers hebben reeds werkkring zowat DIY DNA-extractie. Elke methode heeft zijn voors en tegens, en zijn uiteindelijk niet als efficiënt of vrij van verontreinigingen zoals standaard laboratorium technieken met behulp van silica kolommen of magnetische kralen. De eenvoudigste methode voor DIY-biologen gebruikt papier stempels, vergelijkbaar met een bloed vlek kaarten, die gebruik maakt van warmte (van een thermische cycler in PCR) als de belangrijkste DNA-extractiemethode maar het is ook de minst efficiënte als gevolg van de invoering van PCR-remmers (voor menselijke DNA, bloed of Wang wissers kunnen worden toegepast op het papier). De andere methode populair voor DIY biologen maakt gebruik van detergentia en alcohol, een moeilijk proces omdat de twee vloeistoffen mengbaar zijn, maar twee ' ibles hier en hier doen uitstekend werk uit te leggen. U kunt ook experimenteren met andere detergentia/proteasen, ik heb gezien schotel zeep, shampoo en vlees tenderizer alle gebruikt.
Ik ben gedeeltelijk aan de alcohol en afwasmiddel/protease methode om haar hogere efficiëntie en rendement, hoewel grote zorg moet worden gebruikt bij het minimaliseren van de besmetting en overdracht van alcohol en detergentia/proteasen. De effecten van overdracht kunnen worden geminimaliseerd door hulpprogramma's gesteriliseerde overdracht (15 minuten in een snelkookpan met gedestilleerd water) en volledig drogen de DNA-pellet in een steriele omgeving (google steriele techniek, een alcohol-lamp kan worden vervangen voor een bunsenbrander in de meeste toepassingen).
Super DIY-biologen kunnen hun spel omhoog door het bouwen van een spectrofotometer om te kwantificeren van hun DNA. Ik zal niet dit hier behandelen, maar u kunt beide blik in één van Openbare Labs of door volgende van de verschillende instructables daarop aanpassen. Hoe dan ook, hebt u om het te bouwen zodat het cuvettes met vloeistof in hen zal accepteren.
