Stap 5: stoichiometrie
Terwijl we voor onze bestellingen wachtten te komen van de IDT en Tilibit, moesten we sommige stoichiometrie om te bepalen van het exacte bedrag van chemicaliën en DNA te gebruiken in onze experimenten doen.
Gegeven de reactanten:
Van Tilibit:
- 500 μl 100 nM steiger
- 500 μl 10 X vouwen buffer
- 500 μl 200 mM MgCl2
Van IDT
- 111 x 25 nmol nietjes in 2 x 96 goed platen
Een definitieve reactie van veronderstellen
- 1 X buffer
- 12 mM MgCl
- 20 nM steiger
- 200 nM elke nietje
Neem aan dat 1 uL van elke geresuspendeerde nietje zal worden toegevoegd aan een oplossing met een eindvolume van 200 uL.
Bereken dat het volume van MgCl2 nodig voor de productie van een concentratie van 12 mM in een oplossing van de 200 uL gegeven 500uL van de oplossing van een 200 mM.
Het volume van de steiger moest produceren een concentratie 20 nM in een 200 uL oplossing gegeven 500 uL een 100 uM oplossing berekenen.
Bereken het volume van de buffer die nodig zijn voor het produceren van een concentratie van 1 x in een oplossing van de 200 uL gegeven 500 uL van een 10 X bufferoplossing.
Vergeet niet dat 1 X buffer is samengesteld uit
- 5 mM Tris
- 1 mM EDTA
- 5 mM NaCl
en dus de 10 X buffer is samengesteld uit
- 50 mM Tris
- 1 mM EDTA
- 5 mM NaCl
Dit helpt ons het volume berekenen. Dus neem een van de onderdelen van de buffer en bereken dat het volume van Tris nodig voor de productie van een concentratie van 5 mM in een oplossing van de 200 uL gegeven 500uL van een oplossing van 50 mM.
Of we kunnen gewoon beseffen dat 10 X op 1 X een verdunning van 1/10 is!
Nu berekenen de componenten van de uiteindelijke reactie gegeven een eindvolume van 200 uL:
Nu berekenen het nietje resuspensie volume en de concentratie gezien de 1 uL distributie volume en 25 nmol massa van elke nietje.
