Stap 3: PCR versterken
Met passende inleidingen kan u uw opeenvolging van keuze versterken. Als je hebt weten te bemachtigen van sommige Arabidopsis thaliana dan het volgende zou werken moeten voor het versterken van de ACT2 (At3g18780 http://www.arabidopsis.org/servlets/TairObject?accession=locus:2093954 ) die een mooie positieve controle zal zijn, ze werden ontworpen door mijn vriend John Hamilton van Durham University.
Voorwaarts
5' GGATCGGTGGTTCCATTCTTGC
Omgekeerde
5' AGAGTTTGTCACACACAAGTGCA
Ze werken goed met een onthardende temp van 56-58-C. Ze span een intron dus genomic zal geven 342bp product, maar als je ze voor rt-PCR gebruiken en cDNA 256bp zal geven.
De afbeelding is een agarose gel van een PCR, het DNA wordt toegevoegd aan de putten en een elektrische huidige beweegt, kan het door het gel, klein beetje wiebelen via sneller dus verder bewegen. Op de linkerkant is een marker van de moleculair gewicht gemaakt van verteerd phage DNA, de bands zijn bekend maten dus kunnen gebruikt worden om te beoordelen van de grootte van onze PCR producten. Ethidiumbromide werd toegevoegd aan de gel zodat het DNA kan worden gevisualiseerd met UV.
